产品描述 

  金担子素 A（Aureobasidin A，AbA）是从丝状真菌 Aureobasidium pullulans No. R106 中分离出来的环酯肽类抗生素，具 有很强的抗真菌能力。在较低的浓度下（0.1-0.5 μg/ml）即可对酵母产生毒性。对其敏感的真菌种类包括：出牙酵母 （Saccharomyces cerevisiae）、粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、光滑念珠菌（Candida glabrata）、构巢曲霉 （Aspergillus nidulans）和黑曲霉（A. niger.）。作用机制在于 AbA 抑制了真菌生长所依赖的肌醇磷酰胺（inositol phosphorylceramide，IPC）合成酶的活性，干扰鞘脂合成，从而进一步杀死菌株。编码 IPC 合成酶的基因研究较多的有来自 酿酒酵母菌的 AUR1 基因，以及构巢曲霉的 AURA 基因，两者具有同源性。通过对这些编码基因进行突变即可使得菌株对 AbA 产生抗性，如 AUR1-C 基因。 AbA 非常适合用作阳性克隆子筛选用的药物选择性标记。AbA 抗性也是酵母单/双杂交研究中理想的报告子。本品为溶 于甲醇的 AbA 溶液，浓度为 1 mg/ml。具体的工作浓度取决于宿主细胞的敏感度（见表 1. AbA 对各种酵母菌的最低抑菌浓 度（MIC））。 

产品性质 

分子式（Formula） C60H92N8O11 

分子量（Molecular weight） 1,100 Da

纯度（Purity） ≥95% 

熔点（Melting point） 155-157℃ 

结构式（Structure）

运输和保存方法 

冰袋运输。4℃保存。

操作步骤（抗 AbA 的酵母转化系统）

1） 加入 0.5 ml 过夜培养的酵母到 50 ml YPD 培养基中（配方：1L 液体培养基含有 10g yeast extract，20g polypeptone， 20g D-glucose；固体培养基另外加入 2%琼脂；）。

2） 30℃培养约 6 小时，测定 OD660 为 1～2。使用二倍体时，测定 OD660 为 2～4。

3） 1,000×g 离心 5 分钟。

4） 用 10 ml Solution A（配方：100 mM Lithium acetate，10 mM Tris-HCl pH 7.5，1 mM EDTA）悬浮沉淀，1,000×g 离心 5 分钟。

5） 用 Solution A 重悬沉淀，直到 OD660 为 150。 

6） 在管内分取 100 µl 细胞悬浮液，30℃培养 1 小时。

7） 加入 5 µg 载体（环状或线性 DNA）和 150 µg Carrier DNA（已经过 100℃加热 10 分钟，并迅速冷却）。 注：pAUR101 需使用线性 DNA 进行转化。使用环状 DNA 会降低转化效率甚至转化不成功。pAUR112 和 pAUR123 需 使用完整的质粒 DNA 进行转化。

8） 加入 850 µl Solution B（配方：取 40 g Polyethylene Glycol 4000 溶于 100 ml Solution A 充分溶解，需要现用现配），轻轻 混匀。 

9） 30℃培养 30 分钟后，42℃培养 15 分钟。 

10） 室温放置 10 分钟。 

11） 5,000 rpm 离心 1 分钟，用 5 ml YPD 培养基悬浮沉淀。 

12） 30℃培养 6 小时~过夜。 

13） 5,000~10,000 rpm 离心，用 1-10 ml 0.9% NaCl 悬浮沉淀。

14） 在 YPD 选择培养基平板（含有一定浓度的 AbA，依菌株类型而定）上接种 100 µl 细胞悬液。30℃培养 3-4 天后转化完 成。 

15） 挑取阳性转化子，和/或测定转化效率（以每微克质粒 DNA 转化的菌落数来表示）。 

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）AbA的最佳工作浓度因宿主细胞不同而有差异，可根据最低抑菌浓度（MIC）来确定。