------------细胞骨架的染色神器
鬼笔环肽是从毒蕈类鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)中得到的有毒环状七肽,它的作用与细胞松弛素B恰好相反,,只与聚合的微丝结合,,而不与肌动蛋白单体分子结合。鬼笔环肽通过与聚合的微丝结合,抑制了微丝的解体,,破坏了微丝的聚合和解聚的动态平衡。用FITC和Rhodamin等荧光物质标记的鬼笔环肽可特异的与真核细胞的F-actin结合,从而显示微丝骨架在细胞中的分布。
产品特点:
(1)亲和力高:Kd= 20 nM;
(2)特异性强:选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin,而不会与单体肌动蛋白G-actin结合;
(2)优于抗体染色:鬼笔环肽无物种限制,且几乎不存在非特异性染色,染色区和非染色区域对比性极其明显;
(4)灵敏度高:纳摩尔浓度(nM)染色即可满足实验要求;
(5)兼容性好,肌动蛋白活力不受影响:鬼笔环肽衍生物很小,直径约12-15Å,分子量<2000 Da,标记后的肌动蛋白许多生理特性都得以维持;
(6)适用范围广:无物种差异性;同样适用于甲醛固定和打孔处理后的组织样本。
实验流程:
鬼笔环肽的配制:
0.1mg鬼笔环肽溶于1ml无水甲醇(也可用DMSO或无水乙醇溶解)配成贮存液,可在-20度避光的条件下长期保存,工作液的浓度为5ug/ml,由贮存液加生理盐水PBS稀释20倍即可。
染色程序:
生理盐水PBS清洗细胞2次,每次10分钟;3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分钟,生理盐水PBS清洗细胞2次;加入5ug/ml的FITC-鬼笔环肽室温染色30-60分钟,夏季时间可以短一些,生理盐水PBS清洗细胞2次;DAPI或hoechst33258染细胞核10分钟,生理盐水PBS清洗细胞2次;吸去多余水分,加荧光封片液(中性或偏碱性缓冲液加等量甘油),盖上盖玻片,荧光或共聚焦显微镜下观察。
染色结果:
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图1. 肌动蛋白以及细胞核探针染色的HeLa细胞图。绿色为FITC标记的鬼笔环肽(Cat#:40735ES75, 100 nM);红色是伪色代表DAPI染色结果(Cat#: 40727ES10, 2 ng/ml DAPI)。共聚焦显微镜40×物镜观察。 |
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图2. 肌动蛋白以及细胞核探针染色的HeLa细胞图。红色为TRITC标记的鬼笔环肽(Cat#: 40734ES75, 100 nM);蓝色为DAPI染色结果(Cat#: 40727ES10, 2 ng/ml DAPI)。共聚焦显微镜40×物镜观察。 |
订购信息:
产品 |
货号 |
规格 |
价格(元) |
Amino-Phalloidin 氨基鬼笔环肽 |
40733ES03 |
1mg |
6399.00 |
TRITC Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽 |
40734ES75
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300T
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766.00
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40734ES80
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1mg
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6456.00
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FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽 |
40735ES75 |
300T |
766.00 |
40735ES80 |
1mg |
6456.00 |
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iFluor™ 488 phalloidin iFluor™ 488标记鬼笔环肽(绿色) |
40736ES75 |
300T |
1689.00 |
iFluor™ 555 phalloidin iFluor™ 555标记鬼笔环肽(橘色) |
40737ES75 |
300T |
1689.00 |
iFluor™ 647 phalloidin iFluor™ 647标记鬼笔环肽(远红) |
40762ES75 |
300T |
1689.00 |
Phalloidin 鬼笔环肽 |
40774ES03 |
1mg |
5788.00 |
40774ES08 |
5mg |
18728.00 |