CellTracker CM-DiI 活细胞染色剂
目录号:C7000 | 规格:50ug |
CAS号:180854-97-1 | 品牌:thermofisher |
产地:usa | 货期:现货 |
保存温度:-20℃ | |
描述
CellTracker CM-DiI 为 DiI 衍生物,在水中的溶解性比 DiI 要好一些,有利于制备悬浮细胞和固定细胞的染色溶液。 CellTracker CM-DiI 含有能与硫醇反应的氯甲基基团,使染料可以共价结合到细胞硫醇上。 这样,与其它膜染料不同,一些细胞可在所有固定和渗透步骤中保持稳定的标记。 我们还提供 1 mg 瓶装形式的 CellTracker CM-DiI(C-7001)。
化学结构
使用方法
1. 染色液制备 1 )配置 DMF , DMSO 或 EtOH 储存液:储存液用 DMF 、 DMSO 或 EtOH 配制浓度 1-2mg/ml 。 注: 未使用的储存液保存在 -20 ℃,分装保存,避免反复冻融。 2 )工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基, HBSS 或 D-PBS )稀释储存液,配制浓度为 1 ~ 2 μM 的工作液。 注: 最佳的工作液浓度请根据不同细胞和自身的实验体系来调整。 2. 细胞标记 (悬浮细胞) 1 ) 在标记前根据实验要求按照上述方法配制好工作液; 2 ) 建议待标记细胞在染色工作液中于 37 ℃孵育≤ 5min ,再于 4 ℃孵育 15min (低温孵育可降低细胞对染料的内吞作用,有助于染料对质膜的标记,并且降低染料定位细胞质囊泡的可能性)。 3 ) 标记完成后,用 PBS 清洗细胞,并用新鲜培养基重悬细胞。 注: 对于贴壁细胞,可直接就贴壁状态的细胞进行荧光标记,相较于消化处理后的细胞具有更高的活力。 2. 染色后处理 1 ) CM-DiI 染色后的细胞直接用 3.7% 甲醛(溶于 PBS ),于 37 ℃固定 10min ; 2 )室温条件 PBS 清洗 2 次,每次 5min ; 3 )于 -20 ℃中,用丙酮透化处理 10min ; 4 )室温条件 PBS 清洗 2 次,每次 5min ;并根据自身的实验要求以及细胞类型,进行后续的实验如石蜡包埋 - 免疫组化分析,电镜分析等。有报道提到,经 CM-DiI 染色后的大鼠嗜铬细胞瘤细胞可兼容 2%(w/v) 多聚甲醛和 0.2%(w/v) Triton X-100 的透化作用;从绵阳淋巴细胞内再次纯化的 CM-DiI 标记细胞,经甲醛固定,石蜡包埋,切片,二甲苯脱蜡,梯度乙醇,以及脱水后仍能维持荧光; |